纠正珠蛋白基因的表达2022-08-02 09:27:07
在β-地贫患者中发现了200多种不同类型的Hb基因突变，这种突变可能位于DNA片段中的任何位置，其中包含三个外显子、剪接位点和其他调节元件，治愈β-地贫等遗传性疾病的理想方法是纠正导致这种疾病的突变。近年来，利用CRISPR/Cas9技术在特定位点来制造特定的DSB和HDR以纠正特定的基因突变已经成为首选的方法；在人类的多能干细胞中，同源重组基因打靶尤为困难，CRISPR技术的最新发展为提高同源重组率提供了新的途径，使用ssODNs代替供体载体修复HBB基因突变，并插入带有Cas9基因的选择标记，这避免了使用供体载体作为HDR模板时遇到的问题；ssODNs对HDR更有效、细胞毒性更低。Cai等人的研究为利用CRISPR/Cas9技术来纠正各种Hb突变成为一种通用的策略提供了原理证明，在其研究中使用了两个有效的引导RNA和一个DNA模板，该研究证明了这种通用的方法能够纠正各种Hb基因突变，恢复β-珠蛋白的产生。对β-地中海贫血患者体内的IPSCs进行基因编辑可以为治疗这种疾病提供一条新的途径，纠正IPSCs的致病突变可以恢复正常功能，并为移植提供了丰富的来源。在Xie等人的研究中，利用了CRISPR/Cas9技术，有效的纠正了患者来源的IPSCs中的HBB突变，且在矫正的基因中没有检测到非靶点效应，细胞保持了完全的多能性，并显示出正常的核型，从而证明了未来基于干细胞的基因治疗在单基因疾病中的应用迈出了关键的一步。在Niu等人的研究中，设计了针对HBB基因 CD41/42突变的CRISPR/Cas9，证明了ssODNs与CRISPR/Cas9结合能够纠正β-地中海贫血IPSCs中的HBB基因CD41/42突变。重要的是在该项研究中，根据全外显子测序，没有在矫正的IPSCs的外显子中检测到高突变负荷，这对未来的临床应用是必不可少的，这为那些骨髓与潜在捐赠者不匹配的人提供了一种新的治疗选择。
出自《CRISPR/Cas9在β-地中海贫血治疗中的研究进展》作者贺静，吴柳娇.
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