VQR和VRER变体在人类细胞中表现更强的特异性2022-08-03 08:31:21
近年来，许多改良的广泛靶向性的工程化Cas9蛋白已被开发出来，例如 Cas9切口酶或Fok1与降解的sgRNA融合来执行ssDNA的断裂，这可以显著的降低WTCas9变体的脱靶效应。同时也可以通过改变CRISPR/Cas9核酸酶的PAM识别位点而不损失靶向特异性来增加CRISPR/Cas9核酸酶的靶向能力，具有改变PAM靶向性的Cas9核酸酶的不同变体，如VQR和VRER变体在人类细胞中表现出更强的特异性，其他的变体还包括xCas9，它可以识别比自然Cas9更广泛的PAM序列。在Xie等人的研究中，为解决CRISPR/Cas9技术的脱靶效应，使用了最新的高保真的SpCas9-HF1来靶向特定患者的IPSCs。Gehrke等人利用工程化的人APOBE3A结构域来减少非靶向突变，该结构域根据TCR＞TCY＞VCN层级优先使特定基序中的胞苷脱氨基，与人类细胞中广泛使用的碱基编辑器3融合相比，eA3A-BE3融合在TC基序中对胞苷的活性相似，但在其他序列背景下对胞苷的编辑大大减少，eA3A-BE3 纠正β-地贫启动子突变的精度比BE3高的多（＞40倍），并且eA3A-BE3在已知的BE3非靶点上显示出较低的突变频率。
基于CRISPR/Cas9的治疗转化为活体应用是不小的壮举，在临床上有效使用CRISPR/Cas9系统仍然是主要的障碍。将Cas9蛋白导入胞浆和细胞核是CRISPR系统应用的主要障碍，到目前为止，CRISPR/Cas9系统已在体内和体外成功的应用于质粒DNA、mRNA或功能性的蛋白复合物中。
出自《CRISPR/Cas9在β-地中海贫血治疗中的研究进展》作者贺静，吴柳娇.
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