按照6×104个/孔的密度分别将未预处理人脐带间充质干细胞及1ng/mL肿瘤坏死因子α预处理人脐带间充质干细胞接种于24孔板中，用间充质干细胞培养基培养过夜，弃掉孔内上清，实验组各孔加入1mL CFSE标记的外周血单个核细胞悬液（3×108 L-1）及2μL 0.5 mg/mL 植物凝集素M，阴性组为空白孔内加入1mLCFSE标记的外周血单个核细胞悬液 （3×108L-1），阳性组为空白孔内加入1mL CFSE标记的外周血单个核细胞悬液 （3×108L-1），同时每孔添加2μL0.5mg/mL植物血凝素M，培养5d后，收集各组外周血单个核细胞悬液，400×g室温离心5min，弃上清，用300 μL DPBS重悬细胞沉淀，流式细胞仪检测 CFSE 阳性外周血单个核细胞占比，流式检测按照阴性组设门，统计阳性组及实验组的增殖细胞比例。淋巴细胞增殖抑制率 =（ 阳性组增殖细胞比例 - 实验组增殖细胞比例）/（阳性组增殖细胞比例-阴性组增殖细胞比例）×100％。
 

按照6×104个/孔的密度分别将未预处理人脐带间充质干细胞及1ng/mL肿瘤坏死因子α预处理人脐带间充质干细胞接种于24孔板中，用间充质干细胞培养基培养过夜，弃掉孔内上清，实验组各孔加入1mL外周血单个核细胞悬液（3×108L-1），阴性组为空白孔内加入1mL外周血单个核细胞悬液（3×108 L-1），阳性组为空白孔内加入1mL CFSE标记的外周血单个核细胞悬液 （3×108L-1），用含体积分数为10％胎牛血清RPMI1640培养液培养72h。收集孔内外周血单个核细胞悬液，400×g室温离心5min，弃上清，每管加入100μL的DPBS 重悬细胞，对表面标志物CD127，CD4，CD25进行流式染色，观察人脐带间充质干细胞对Treg增殖的促进作用。
 

出自《肿瘤坏死因子α预处理人脐带间充质干细胞的生物学特征分析》作者陈自力，曹宁，徐萌。