基因治疗的载体的应用2022-12-21 08:47:51
对于病毒类的基因治疗产品，工艺中无法进行病毒灭活处理，存在外源病毒因子污染的风险。一般需要进行源头控制（原辅料质控）和过程控制（GMP生产），即对细胞库、病毒库和细胞收获液进行外源病毒因子测试。常规外源病毒因子检测包括体外细胞培养法和体内法，需要中和抗体排除主病毒的干扰，但是病毒样品一般滴度较高，尤其是对于复制型的溶瘤病毒来说，难以制备满足需求的中和抗体。虽然基于PCR的方法灵敏度高，但是只能检测特定的病毒因子。高通量测序技术理论上可以检测潜在的病毒因子，已有研究表明，基于HTS方法的灵敏度明显高于体内法。一般病毒需要进行改造后才能作为基因治疗的载体，包括降低毒力和免疫原性、改变复制特性及靶向特性等。以腺病毒为例，基因治疗用腺病毒一般将E1或E3基因缺失，使其不能复制，而溶瘤腺病毒通常缺失E1A-CR2或将肿瘤组织特异性启动子取代E1A基因自身的启动子，使其在肿瘤细胞内选择性复制。而腺病毒生产过程中，HEK293细胞的E1区可能与病毒基因组发生重组，产生复制型或野生型病毒，带来安全性风险。常用的检测方案为PCR法或细胞培养结合PCR法。后者先经过多轮培养，扩增潜在的复制型或野生型病毒的同时也可以稀释样品中存在的宿主细胞E1区残留，再采用PCR进行检测。但是该方法存在细胞用量大、检测周期长等问题。
对于产品的相关杂质，除了空壳病毒、不完整病毒及聚集体的检测，还应重点考虑非目标核酸，即主成分之外的核酸，尤其是错包装的核酸，以rAAV为例，主流的三质粒包装系统容易将宿主来源的DNA、包装/辅助质粒DNA等非目标核酸错误包装在衣壳内，具有潜在的安全性风险。CDE新发布的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》中明确，如使用了肿瘤细胞或携带致瘤表型、病毒序列的细胞，需对DNA的残留量和残留片段大小进行控制。
出自《基因治疗产品质量控制策略及面临挑战》作者于雷,史新昌,秦玺.
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