抗体工艺参数对蛋白产量和关键质量属性的影响2022-12-22 08:36:12
培养温度对电荷异构体的影响有很多文献报道，其中Zhang Xintao等人研究显示，降低温度会显著降低酸性电荷异构体，提高碱性异构体，而主峰比例保持不变，与研究结果一致。补料体积会影响蛋白的生成和聚体的增加，补料是浓缩的营养物质，为细胞的生长代谢提供充分的能源和营养，所以在一定程度范围内，提高补料体积利于蛋白的生成和表达，但过多的营养供给会使蛋白更容易聚集，进而提高了聚体的比例。商业化补料因营养成分浓度高而渗透压较高，普遍都在1000～1500Osm之间，增加补料体积容易导致培养液中渗透压偏高，有文献报道，提高培养液渗透压，培养后期细胞活性逐渐下降，易诱导蛋白聚体的形成。本研究实验另一个发现，这三个工艺参数对聚体、电荷异质性和蛋白表达量都产生了一定程度的影响，但对高甘露糖比例影响甚微，更大可能是与细胞株本身的特性关系密切，因此，在早期进行细胞株筛选时可重点关注Man5糖型的修饰。综合以上工艺参数对蛋白产量和关键质量属性的影响，根据本项目的预设标准，进行了最佳工艺参数设计空间的建立，接种密度（1.3±0． 2）×106cells/mL，培养温度:36．5±0.5℃，补料策略: 第3d、13d补加3％，第5d、7d、9d、11d补加3.5％。在2L生物反应器上进行工艺确认，转速、DO、pH控制、通气策略等都采用平台参数，平行培养两个罐子，同时设立原工艺对照组。从结果可以看出，优化后的工艺活细胞密度峰值提高了11％，蛋白产量提高了15％，质量符合预期标准。综合蛋白产量和蛋白关键质量数据，优化后的细胞培养工艺结果与模型预测结果一致，并且具有可重复性和可放大性。后续会继续对本项目进行200L规模的放大研究来进一步证明工艺的稳健性和确定性筛选设计实验方法的可适性。
出自《确定性筛选设计优化双特异性抗体细胞培养工艺》作者张轩，吕明，丁晓然.
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