RNA干扰模式动物果蝇构建体系2023-02-06 08:31:42
利用此系统构建转基因干扰果蝇品系，首先需要在网站预测shRNA序列，并构建shRNA质粒，收集表达整合酶和携带attP位点果蝇的卵并注射shRNA质粒，卵孵化后的果蝇即G0为浅红眼，G0与浅红眼果蝇杂交，去除整合酶并根据眼睛颜色深浅确定转基因果蝇，深红眼果蝇是携带转基因的果蝇，但由于深红眼与浅红眼色差不大，初学者挑选深红眼需要在孵化成虫后6个小时内进行。深红眼转基因果蝇进一步与携带平衡子的果蝇杂交，得到转基因干扰果蝇品系，经提取DNA测序确认后，编号（TH代表清华，R代表RNAi）并存储资源库。利用此技术，清华大学果蝇中心针对果蝇中与人类基因高度同源的致病基因构建了数千株品系。与基因突变相比，构建转基因干扰果蝇周期短、成本低、便于保存，特别是在研究因基因缺失而产生组织器官的表型时，转基因干扰表型均一，可重复性高，所以转基因干扰是研究基因功能的重要工具。虽然新一代转基因干扰技术相比于第三代技术有了多维度的改进，但其单个 shRNA调控基因表达的效率较之第三代并无显著提升，这是由新一代系统使用的DSCP启动子本身转录水平决定的。因此，继续研发下一代转基因干扰技术，提升干扰效率，对发育生物学研究具有重要意义。
研究基因的功能、挽救敲低或敲除基因产生的表型，都离不开目的基因的过表达。传统的过表达方式主要利用Gal4/UAS系统，组织特异性驱动目的基因cDNA的转录，实现过表达的目的，但是，此方式存在相关载体构建复杂，时间成本高，难以同时实现多个基因的过表达等缺点，尽管利用现有cDNA质粒资源库可省略克隆步骤，但过表达所用序列只能依靠现有质粒资源库，且仍未解决难以同时实现多个基因过表达的问题，因此亟需一种简单的基因过表达或基因激活系统。
出自《模式动物果蝇的基因调控前沿技术》作者韩玉婷，许博文，李羽童.
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