本研究也证实，CD34+干细胞分布于小鼠肠系膜动脉和主动脉外膜和内膜层。常见细胞原代分离方法主要有组织块贴壁法和酶消化法。在现有关于血管壁干细胞的原代分离的报道中，酶消化法分离血管壁干细胞主要用于单细胞测序，而用于后期研究培养的血管壁干细胞主要使用组织块贴壁法来获取细胞。故本研究采用了组织块贴壁法获取血管壁细胞，然后利用磁珠分选CD34+干细胞。分选的血管壁CD34+干细胞免疫荧光染色检测CD34呈阳性，不表达内皮细胞标志物CD31以及平滑肌细胞标志物SMMHC、SM22，这与已有的研究报道基本一致。以往报道，血管壁CD34+干细胞能够向平滑肌细胞分化，然而最近Jiang等人通过急性分离小鼠股动脉血管壁细胞单细胞测序发现，CD34主要在内皮细胞群和间充质细胞群中表达，平滑肌细胞群中不表达CD34。且体内实验证实血管壁CD34+干细胞能够分化为内皮细胞参与血管损伤后修复。
 

故在本研究中，我们检测了血管壁CD34+干细胞向内皮细胞和成纤维细胞分化的能力，结果显示定向分化后内皮标记物及成纤维标记物的表达较分化前明显增高，提示血管壁CD34+干细胞能够分化为内皮细胞和成纤维细胞。此外培养的血管壁CD34+干细胞表达细胞核内分裂增殖相关蛋白Ki67，由此说明本研究方法分离培养的血管壁CD34+干细胞具备干细胞多向分化和强增殖特性。由于血管壁干细胞具有异质性，采用该方法分选的血管壁CD34+干细胞，同时带有其他干细胞阳性标记物如Flk-1、c-kit、Sca-1，存在不同的亚群，故其形态可能存在差异。
 

出自《小鼠血管壁 CD34+干细胞的分离、培养及鉴定》作者杨礼菊，马颖，李源.