鲎试剂与内毒素所形成的凝胶是不可逆的2023-05-17 08:54:25
凝胶限度试验是半定量检测方法，用于判定供试品中细菌内毒素含量是否在符合规定的限值范围。其工作原理是鲎试剂含有C因子、B因子、G因子、凝固酶原、凝固蛋白原等多种丝氨酸蛋白酶类物质，能与内毒素产生凝集反应，形成肉眼可见的坚固凝胶，凝胶形成速率与内毒素浓度呈正相关；其方法简单、经济，结果可靠，重复性好，不需要特别的实验室设施；缺点是特异性不强，不能直接反映供试品中内毒素的量值，判断结果有主观性，技术人员需要操作熟练，精准量取液体。其次，内毒素检测受环境与供试品的浓度、温度、反应体系中Ca2+、Mg2+离子浓度和pH值等因素的影响。细菌在自然界分布广泛，操作中有微生物污染，出现假阳性；因而试验操作需在洁净的实验环境中遵循无菌操作，避免较大空气对流。另外，鲎试剂在液态时极不稳定，鲎试剂复溶后在10min内使用，不能超过30min，在室温放置太久会影响反应灵敏度；鲎试剂与内毒素所形成的凝胶是不可逆的，试验过程中一旦凝胶受到振动就容易变形脱落，造成假阴性结果，因而要求加样混匀过程中动作需轻柔，恒温器需放置在温度稳定，无振动的环境中。
首次检测供试品细菌内毒素时，需进行鲎试剂的灵敏度复核试验、供试品的干扰初筛试验和干扰验证试验；当鲎试剂的产家、批号出现变更时，需要重新进行鲎试剂的灵敏度复核；当供试品的处方、生产工艺或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，需要重新进行干扰试验，而且需要对 批样品进行干扰试验后，结果一致才能确定供试品日常检查的稀释倍数。
出自《凝胶法测定脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素》作者陈耐寒,赵倩,李丽.
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