切向流过滤所获得的MSC-EV量提高至18倍2023-08-16 08:54:33
目前，MSC-EV的收集方法主要依赖于其生物物理特性，即根据囊泡的大小，而采取差速离心、高分子聚合物沉降及过滤浓缩等方法。然而，MSC-EV是一群由不同组织构成、各组份间成分迥异的复合体，无论从大小、密度以及某些关键分子的表达方面，各组份间都有重叠。Gonz- lez-Cubero等比较了沉降法与差速离心法所获取脂肪MSC-EV的差异，结果显示，沉降法获得的MSC-EV收获率较高，其外泌体成分比例高，表面CD9分子表达高，但囊泡直径偏大，电子显微镜下观察MSC-EV呈球形，悬液中有较多背景成分，可能是脂蛋白多聚体；差速离心法获得的MSC-EV，外泌体成分比例较低，电子显微镜观察背景干净，囊泡平均直径较小，但可能受离心重力的影响囊泡多塌陷呈杯状。然而，上述方法均不适合大量处理细胞培养上清。近年来使用的切向流过滤浓缩技术，可能是解决该问题的有效途径。与传统的差速离心法相比，切向流过滤所获得的MSC-EV量提高至18倍。通过选择不同孔径的过滤包，切向流过滤可使用同一装置完成细胞碎片及大囊泡去除和小囊泡截留多个步骤，获得的MSC-EV大小一致性较好，其功能可能较为稳定。体外细胞学实验发现，切向流浓缩获得的MSC-EV，与差速离心收获的囊泡相比具有更强的抗细胞凋亡作用。利用切向流过滤法收获脐带MSC-EV，收获量比差速离心法高90多倍，且其中脂蛋白成分含量极低，可见切向流过滤浓缩是目前较好的收集MS-EV的技术。然而，切向流过滤所收获的最终产品中囊泡浓度偏低，应结合其他方式，如吸附洗脱凝胶层析、高分子聚合物沉降等技术，以提高MSC-EV浓度达到治疗级别。
出自《间充质干细胞胞外囊泡成药性研究进展》作者刘玉爽,孙媛,郭子宽.
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