小分子ＩＢＥＴ１５１抑制Ｃ⁃ＭＹＣ表达2023-10-13 08:33:06
２０１０ 年，Ｔａｋａｙａｍａ等首次报道了利用人表皮成纤维细胞来源的ｈｉＰＳＣｓ利用饲养层细胞共培养体系诱导分化功能性血小板的成功案例。该方案中瞬时激活Ｃ⁃ＭＹＣ表达对ｈｉＰＳＣｓ高效生成血小板至关重要。在此基础上，Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ等首先将犬胚胎成纤维细胞来的犬诱导多能干细胞成功分化为ＭＫｓ和血小板。这是首次从大动物模型中获得功能性血小板的研究。以上方法都依赖于含血清培养液和饲养层细胞，难以避免相关免疫反应。２０１４年，Ｆｅｎｇ等提出了１种在无血清、异种物质和饲养细胞条件下，使用造血内皮中间体而非ＥＢ从ｈｉＰＳＣｓ中大规模生产功能性血小板的方法。该研究通过小分子ＩＢＥＴ１５１抑制Ｃ⁃ＭＹＣ表达，提高ＭＫｓ向血小板分化的效率。所产生的血小板同样在形态和功能上与外周血小板相似。Ｎａｋａｍｕｒａ等通过将Ｃ⁃ＭＹＣ、原癌基因Ｂ细胞特异性鼠白血病毒插入位点⁃１和原癌基因 ＢＣＬ⁃ＸＬ依次导入ｈｉＰＳＣ来源的ＨＰＣｓ后继续分化培养，可建立永生化巨核细胞祖细胞系。该方案可以大量冷冻储存ｉｍＭＫＣＬｓ作为主细胞库，然后按需解冻、扩张并分化血小板。由于增殖能力的原因，在２５～５０Ｌ培养基条件下，理论上５ｄ内ｉｍＭＫＣＬ大约产生１０１１个血小板，相当于１次输血量，但每个ＭＫｓ仅产生１０个血小板，而且功能不如天然血小板。
２０１６年，Ｍｏｒｅａｕ等通过在ｉＰＳＣｓ向ＭＫｓ分化过程中过表达ＧＡＴＡ１、ＦＬＩ１和 ＴＡＬ１，建立了１种可冷冻、可扩增的巨核细胞系⁃正向程序化巨核细胞，ｆｏｐＭＫｓ可在高浓度 ＴＰＯ（１００ｎｇ·ｍＬ－１）和ＩＬ⁃１β刺激下持续扩增６0ｄ；如果将培养条件改为低浓度 ＴＰＯ（２０ｎｇ·ｍＬ－１）和ＳＣＦ，ｆｏｐＭＫｓ可稳定增殖至少９０ｄ。另外，ｆｏｐＭＫｓ可以在解冻复苏后继续增殖数月，纯度超过９０％。虽然这种方法可大规模生产血小板，但此类血小板成熟度同样不如天然血小板，并且在小鼠体内的半衰期较短。
出自《诱导多能干细胞体外分化血小板技术的研究进展》作者岳伟 顾海慧.
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