这是干细胞及类器官领域的一大技术进步，是一个里程碑事件。采用三维培养系统，以基底膜提取物作为细胞外基质，加入Wnt3a、Ｒ-spondin-1、Noggin、EGF、FGF10、SB202190、A83-01、B27、烟酰胺等因子进行培养，构建食管腺癌类器官。从患者活检组织中，Kijima 已成功建立 ESCC 类器官的方法。他们用组织消化液对 ESCC 活检组织进行消化，37 ℃，45 min 孵育。每毫升组织消化液中主要包括 6．25 mg /ml 中性蛋白酶Ⅰ（ Dispase Ⅰ） ，5 mg /ml胶原 酶 （ Collagenase ） ，10 mmol /L ＲOCK 抑 制 剂 和0．5 mg /ml两性霉素 B（ fungizone） 。孵育后重悬细胞并离心，再用质量浓度为 2．5 g /L 胰酶（ 含 EDTA） 消化液孵育（ 37 ℃，10 min） 后，用含 250 mg /L 大豆胰蛋白酶抑制剂（ Soybean trypsininhibitor） 的 PBS 溶液中和胰酶消化。细胞悬液用70μm细胞筛进行过滤后，用DMEM/F12 完全培养基进行培养。DMEM/F12完全培养基中主要包含100U/ml 青霉素、100 μg /ml链霉素，HEPES。
 

细胞计数后，用 50 μl Matrigel 包含 2×104个细胞均匀铺在24孔细胞培养板板内底部，待凝固后，再添加500μl类器官培养基。类器官培养基主要包含DMEM/F12 基 础 培 养 基，1 × N2，1 × B27，0．1 mmol /L N-乙酰-L-半胱氨酸（ N-acetyl-L-cysteine），50 ng /ml 重 组 人 EGF，2％Noggin /Ｒ-Spondin-1，100 ng /ml重组人 Wnt3a，500nmol/L A83-01，10 nmol/LSB202190，10 nmol /L胃泌素（ Gastrin） 、10 nmol /L 烟酰胺（ Nicotinamide） 和 10 mmol /L Y27632。常规培养条件培养 10～ 14 d，期间需用倒置相差显微镜定时观察细胞状态、数量和直径; 用台盼蓝染色以确定细胞活力; 用含有 Dispase Ⅰ的 Matrigel 将细胞球消化，固定后进行组织学检查鉴定，观察第 14 天 50 mm 的细胞球的总量。
 

出自《食管鳞状细胞癌类器官的应用》作者刘卓健，周博，段芳龄。