传统分子诊断技术均具有局限性2023-11-15 08:36:59
针对α－地贫新标志物的同类MS筛查技术正在研发中，基于珠蛋白全肽链的质谱检测新技术，有望成为未来检测血红蛋白病的“一线筛查方法”，从而改变传统的地贫遗传筛查操作流程。根据血液学表型筛查结果检出阳性样品后，需利用DNA检测技术在分子水平上鉴定致病基因β－珠蛋白基因或α－珠蛋白基因的突变类型及基因型，这样才能达到确诊的目的。地贫的传统分子诊断一般以PCＲ技术为基础，国内外比较成熟的诊断缺失型α－地贫和δβ－地贫/HPFH大片段缺失，多采用跨越断裂位点和多重连接依赖探针扩增技术，前者应用于检测常见的缺失型α－地贫突变—－α3．7，－α4.2和－－SEA等，后者用于检测目标序列的拷贝数异常以及大片段缺失，除验证已知缺失类型的突变外，通常也用于鉴定未知大片段缺失型的地贫样本。检测地贫基因点突变的技术有PCＲ结合反向斑点杂交和分子信标探针熔解曲线技术等，这些技术均依据已知突变位点及序列设计探针，用于检测α－或（和）β－地贫突变及其基因型。传统分子诊断技术均具有局限性，如Gap－PCＲ和PCＲ－ＲDB实验操作过程较繁琐，检测突变种类数少;MLPA分析则受限于其探针所覆盖范围，且操作过程复杂、耗时长，不适用于大样本检测; 熔解曲线技术突变图谱复杂，结果判定需要足够的经验，且受技术稳定性影响等。近 10多年来，随着高通量测序技术的发展，使地贫的诊断更加全面与快捷。应用于全基因组、外显子组或靶向基因组的二代测序技术可快速高通量地全面检测各种遗传变异，不仅能检测出整个珠蛋白基因编码区及其关键调控区的遗传变异，同时也能检出该病的遗传修饰基因突变，除有助于实现个体化精准诊断外，也为开展地贫的遗传病理机制研究提供了有用的工具。
出自《地中海贫血预防和诊疗技术进展》作者张婷婷，徐湘民.
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