添加相关增效因子是提高VCN的有效方法2023-12-22 09:02:51
目前的研究进展主要为提高LVV的滴度、转导效率以及推进临床实验。由于造血干细胞难以获取,且在分离、培养、转导、检测和植入等过程中易发生细胞的损失;细胞毒性与基因毒性的降低依赖于细胞转导过程中更少的病毒颗粒。因此提高慢病毒滴度以及载体拷贝数极为重要。目前提高滴度及VCN 的方式主要有以下两种:优化LVV结构和添加相关增效因子。缩短LVV 的基因组长度及优化相关元件可以有效提高VCN。由于LVV的滴度和转导效率与病毒基因组长度成反比,通过只保留有效的基因座控制区元件,进而缩短LVV的长度是载体优化的重要手段。另一方面,在优化长度的同时,将LVV内源性RSV启动子替换为CMV启动子,HBB的表达将提高两倍,同时由于内源性启动子的替换,LVV恢复野生型的概率也会大大降低,提高了其生物安全性。以上两种方案是LVV结构优化上的主要研究方向。
添加相关增效因子也是提高VCN的有效方法。一方面,使用转导增强剂可以显著提高LVV对造血干细胞的转导效率。通过加入转导增强剂可以使目的基因的表达量及VCN增加3~6倍,已经进入临床试验的LentiBOOST载体在进行转导实验中加入的转导增强剂:硫酸鱼精蛋白,对转导效率的提高最为明显,总VCN提高了6倍以上。另一方面,白藜芦醇三聚体也是一种增强转导效率的因子。环状白藜芦醇三聚体A可以通过抑制人体对LVV的抗毒性,减少 LVV 在人体内的被抑制,进而增强LVV对造血干细胞的转导效率。BB305载体去除了LCR的HS4区域来增加载体的稳定性和滴度,同时整合了CMV启动子来驱动载体在细胞中的转录。
出自《慢病毒载体在β地中海贫血基因治疗中的研究进展》作者刘译泽,镡颖,朱宝生.
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