由于不同肿瘤组织结构不同，分离扩增TIL的难易程度也不同。通过比较黑色素瘤不同转移部位的肿瘤组织中TIL分离的难易程度发现肺转移来源的肿瘤组织分离扩增出TIL的成功率最高。分离TIL的常规步骤包括：TIL初次扩增阶段，将肿瘤组织剪成碎片，加入含有IL－2的完全培养基培养于24孔板中，大约2 ～ 4周即可收集细胞；TIL快速扩增阶段，收集第一个扩增阶段中聚集生长的TIL培养于含有IL－2、 抗CD3单抗的完全培养基中进行第二次扩增，约14d后收集细胞。常规方法分离扩增TIL的成功率并不高，不能在短期内使TIL数量达到临床数量级。研究表明，生物反应器可以实现体外大量TIL的扩增，但并不是每个实验室都有条件使用生物反应器。随后，有研究通过对普通培养瓶结构进行改造， 制得的G－Rex透气培养瓶能使细胞更好的利用培养基中的营养物质，减少有害物质对细胞的损伤，实现了在实验室条件下获得临床数量级TIL的目的，目前该透气瓶已广泛应用于TIL等免疫细胞的体外大量扩增。
 

体内外实验均证明，TIL能分泌高水平IFNγ、IL－2等细胞因子，通过瘤内注射TIL可使荷瘤小鼠缓解率达到40％。但自从1986年Rosenberg等首次报道提出从肿瘤组织中分离扩增的TIL具有抗肿瘤活性以来，大部分临床研究均围绕黑色素瘤展开。
 

出自《肝细胞癌过继细胞免疫治疗研究进展》作者李艳,严胡铃,石瑛。