肝脏类器官基因表达与功能检测2025-03-25 08:33:53
此外,要进一步进行基因表达和功能检测。肝脏类器官需要在RNA和蛋白质水平表达肝脏特异性功能标志物,包括ALB、肝细胞核因子4和主要药物代谢酶,例如细胞色素P450酶。可使用的具体技术如下:使用RT-PCR定量评估肝脏特异性基因表达,然后检测类器官培养物上清液中的蛋白质水平,这能从一定水平上反映类器官的肝脏功能。使用ELISA检测肝脏类器官合成和分泌血清蛋白,例如ALB和α1-抗胰蛋白酶。或者可以使用LC-MS/MS进行相对定量分析以评估肝细胞功能。该方法能够定量评估ALB蛋白水平,并将其与对照进行比较。此外,药物诱导后可以测量药物代谢酶的活性。氨基酸代谢产生的氨去除过程是重要的肝功能之一,这一过程通过尿素的产生来观察。肝脏类器官还具有积累糖原、吸收和排泄吲哚氰绿及排泄胆汁的能力,所有这些都可以分别使用糖原染色和ICG染色进行定性评估。
脑类器官中的神经组织在体内由外胚层的胚层发育而来。PSCs和ESCs具有分化的全能性。所以,可以在体外刺激PSCs或ESCs发育为拟胚体。许多先前的研究已经证明了在添加碱性成纤维细胞生长因子下的ESC培养基中成功分化EB。此外,大剂量的蛋白激酶抑制剂的添加可以减少细胞死亡。Acharya, Prabha等人发现将ESC接种于超低贴壁96孔板的每个孔中会提高EB的诱导效率。EB的后续神经诱导培养基与Zhang等人创立的培养基非常相似,用来诱导神经玫瑰花结。在体内环境,神经外胚层分化成放射状组织的神经上皮细胞,该神经上皮细胞扩张形成各种大脑结构。同样,在体外使用促进神经上皮细胞的分化培养基中的类器官也具有这种发育过程。
出自《类器官在食品科学研究中的应用进展 》作者:马爱进,白如进,周军君.
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