不同来源的HSC能否采用相同培养条件，扩增潜力有无差异有待确定。HSC干性丢失及造血功能耗竭。HSC扩增可诱导蛋白质应激、活性氧积累及异常折叠蛋白增多。细胞收获和冻存方式不当。体外长时间酶消化细胞，将损伤HSC表面标志物及细胞活力。缺乏特异性表面标志物及完善的分选体系。离体后少数HSC不表达CD34。已报道CD201、整合素-A3可作为前瞻性标志物。
 

添加小分子化合物、高分子聚乙烯醇或前列腺素E2等策略可实现HSC稳定扩增，已处于临床研究阶段。利用仿生骨髓niche的Microniche、骨髓类器官技术、3D培养结合两性离子水凝胶或HDAd5/35++包装tHMGA2基因的体内自扩增等也完成临床前验证。此外，移植前体外测定HSC活性并排除异常整合，可减少对体内量化HSC的依赖；S/G2期HSC的HDR率大幅提升，而G0/G1期HSC以NHEJ修复为主；提高HSC移植数量及质量，能够缩短植入时间，降低感染风险；脐血干细胞移植受限于HSC数量不足，扩增HSC可实现单个供体为多个患者提供产品。
 

基因编辑系统和载体不断更新迭代，但向临床转化仍面临困境：临床前研究和工艺开发具有前沿性和探索性，应用新理论、新技术的产品研发周期长、生产难度大，差异化研发能力薄弱。无论选择何种生产工艺，均需解决剂量探索和长期安全性问题，并改进针对载体和表达产物、整合位点、脱靶效应等的检测方法。缺乏灵长类动物模型，且存在种属差异，评估有效性和安全性仍依赖临床试验。产品质量控制缺乏更准确灵敏的手段。目前常用细胞计数、细胞活力等检测，造血重建能力依赖体内植入，尚未做到移植前评价。
 

出自《地中海贫血基因治疗研究进展及思考》 作者:高欣洁，刘艳，王大威.