地中海贫血其他临床基因检测方法2021-12-10 09:33:35
1989年Saiki等发明的该项技术是目前应用于检测β-地贫较为准确的一种方法,由于β-地贫类型中主要以基因点突变为主,该技术一次杂交可以检测出多个突变位点,同时操作方法简单,因此广泛被临床应用。其主要原理是将扩增的目标产物与尼龙膜条上的特异性寡核苷酸探针进行杂交,再通过显色反应,观察尼龙膜条上有无检测信号(通常信号为蓝色斑点),从而确定待检样本的基因型。高分辨溶解曲线(HRM)技术高分辨溶解曲线技术是一种基因扫描技术,与测序技术相比,它不能用于检测罕见或未知的基因突变。其主要原理是含有SNP位点的DNA单链与另外一条DNA单链不能完全互补配对,在温度变化过程中,核酸染料从不配对的SNP位点上先释放出来,通过检测核酸染料的荧光变化强度从而区分不同的SNP位点和不同基因型。该技术不需要对扩增产物进行后期处理,所以能有效避免污染的发生,同时与其他的扫描技术相比较,该技术具有操作简便、灵敏度高的优点。Turner等在HRM技术基础上联合基因比率分析复制计数PCR技术(GRACE-PCR)开发出一种新的β珠蛋白(HBB)测定法,用于检测点突变或基因重排的异质群体,在实验中成功检测到44种不同的突变基因型。
液态芯片技术是一种新的高通量检测技术,该液相体系中含有两种不同材料组成的多种微珠,通过不同材料比例对微珠进行编码,微珠表面所带的化学基团能够和相应的探针进行交联。该技术的原理主要是针对地中海贫血的突变位点设计PCR引物和杂交探针,PCR扩增分为两部分:一部分为点突变,产物涵盖3个α突变位点和17个β突变位点,共20个突变位点;另一部分为缺失,对3种缺失类型及1个正常对照进行扩增。再对PCR产物进行生物素标记从而获得标记的 PCR 产物,标记的PCR产物与已交联特异性探针的微珠进行杂交,加入显色剂再通过检测系统进行检测,检测系统中有两种不同的激发光,一种能激发微珠,对微珠进行解码,另外一种能够激发生物素产生荧光蛋白,通过荧光强度
对核酸分子进行定量分析。
出自《地中海贫血基因检测与基因治疗》作者胡俊杰,陈鑫苹,符生苗。
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